注射用炎琥寧的細菌內毒素檢查方法確認

摘要】  目的：建立注射用炎琥寧細菌內毒素檢查方法。方法：按《中國藥典》2005年版（二部）附錄收載的細菌內毒素檢查方法及指導原則進行實驗。結果：注射用炎琥寧經1→40倍稀釋后對鱟試劑無干擾作用。結論:細菌內毒素檢測方法可用于注射用炎琥寧的熱原檢查。

【關鍵詞】  細菌毒素 鱟試劑 炎琥寧 HtPot10恒溫金屬浴

     注射用炎琥寧具有清熱、解毒、抗炎的功能，臨床應用于病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染。臨床用藥廣泛，又常用于靜脈滴注，現標準為進行熱原檢查［１］，由于細菌內毒素檢查具有靈敏度高，操作簡便，重現性好的優點。現將細菌內毒素法代替熱原檢查法。

    1  儀器與試劑

混勻器；HtPot10恒溫金屬浴（合肥艾本森科學儀器有限公司）；無熱原吸頭，微量移液器。

    細菌內毒素工作品（CSE，效價70EU/支，批號20053，中國藥品生物制品檢定所）；鱟試劑（TAL，靈敏度0.125EU/ml，批號051109，050210，湛江安度斯生物有限公司）；細菌內毒素檢查用水（批號200050208，含量≤0.03EU/ml，湛江海洋生物制品檢定廠）；注射用炎琥寧（供試品，規格每支0.2g，批號051209、0501018、050926，哈爾濱三聯藥業有限公司）。

    2  方法與結果

    2.1  鱟試劑靈敏度（λ）復核  按細菌內毒素檢查法［２］，用BET水將細菌內毒素工作標準品稀釋成2、1、0.5、0.25λ4個濃度進行實驗。結果表明，靈敏度為0.125EU/ml的鱟試劑符合規定。見表1。將表1數據代入公式λc=lg-1∑xini  λc=0.125。表1  鱟試劑靈敏度復核實驗結果TAL內毒素濃度（EU/ml）0.250.1250.06250.03125靈敏度（λc）051109++--0.125050210++--0.125

　　2.2  注射用炎琥寧細菌內毒素限值（L）的確定  L=K/M，式中K為規定的給藥途徑，人用每千克體重每1h可接受的內毒素zui大劑量，注射劑的K=5.0EU/kg·h；M為人用每千克體重每1h給藥的zui大劑量，經計算，供試品M=1.0ml/kg·h，因此細菌內毒素理論限值為：L=K/M=5/1.0=5EU/ml。

    2.3  供試品的zui大有效稀釋倍數（MVD）  選用靈敏度為0.125EU/ml鱟試劑時，MVD=Lλb=50.125=40倍。

    2.4  供試品干擾初篩試驗  用BET水將注射用炎琥寧（批號051209）分別稀釋成原液、1→10、1→20、1→40系列濃度，以各稀釋濃度供試品將細菌內毒素工作標準品稀釋成2、1、0.5、0.25λb4個濃度的內毒素溶液，與鱟試劑混合進行抑制/增強試驗，結果表明，供試品在較高濃度時對鱟試劑有干擾作用，之外，其直接毒性作用可刺激心血管、肝臟等臟器與功能，是導致肝細胞局灶或彌漫性壞死的主要原因。肝細胞可出現局灶或彌漫性壞死，門脈周圍纖維化。在供試品至少1→40稀釋后則對鱟試劑無干擾作用，